靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的分析方法比较

doi:10.3969/j.issn.1673-5854.2024.01.003

生物质化学工程 ›› 2024, Vol. 58 ›› Issue (1): 18-26.doi: 10.3969/j.issn.1673-5854.2024.01.003

靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的分析方法比较

王成章¹(), 颜洋洋¹^,², 周昊¹, 刘丹阳¹, 商士斌¹, 张华兴³

1. 中国林业科学研究院林产化学工业研究所; 江苏省生物质能源与材料重点实验室; 国家林业和草原局林产化学工程重点实验室; 林木生物质低碳高效利用国家工程研究中心, 江苏南京 210042
2. 南京林业大学江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心, 江苏南京 210037
3. 凯里小生物科技有限公司, 贵州凯里 556000

收稿日期:2023-02-20 出版日期:2024-01-30 发布日期:2024-01-24
作者简介:王成章(1966-), 男, 湖北汉川人, 研究员, 博士, 博士生导师, 主要从事天然产物研究与利用; E-mail: wangczlhs@sina.com
基金资助:
中国林科院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(CAFYBB2021ZC003);贵州科技支撑项目(黔科合支撑[2022]-159)

Comparation of Three Methods of Analytical Methodology of Indigo and Indirubin in Different Indigo Extracts

Chengzhang WANG¹(), Yangyang YAN¹^,², Hao ZHOU¹, Danyang LIU¹, Shibin SHANG¹, Huaxing ZHANG³

1. Institute of Chemical Industry of Forest Products, CAF; Key Lab. of Biomass Energy and Material, Jiangsu Province; Key Lab. of Chemical Engineering of Forest Products, National Forestry and Grassland Administration; National Engineering Research Center of Low-Carbon Processing and Utilization of Forest Biomass, Nanjing 210042, China
2. Jiangsu Co-Innovation Center of Efficient Processing and Utilization of Forest Resources, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China
3. Kaili Small Biotechnology Co., Ltd., Kaili 556000, China

Received:2023-02-20 Online:2024-01-30 Published:2024-01-24

摘要/Abstract

摘要：

以靛膏为原料，采用盐酸酸化、葡萄糖还原和乙酸乙酯提取3种工艺制备靛蓝酸化物、靛蓝还原物和乙酸乙酯提取物。建立高效液相色谱（HPLC）法、紫外可见分光光度（UV）法和双波长紫外分光光度（dW-UV）法，分析3种靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的含量，并以Kolmogorov-Smirnov检验、Bland-Altman偏差图比较和Spearman检验确定3种样品各自最佳分析方法。结果表明：所建立的HPLC法、UV法和dW-UV法简单、准确、灵敏度高、稳定性好和重复性好。3种靛蓝提取物成分含量检测方法均遵从正态分布，两两测定值存在显著差异。UV法更适于分析靛蓝酸化物、靛蓝还原物中靛蓝含量；HPLC法更适于乙酸乙酯提取物中靛蓝、靛玉红含量分析。

关键词: 靛蓝, 靛玉红, 统计分析, HPLC法, UV光谱法

Abstract:

Using indigo paste as raw material, indigo acidification substances, glucose reducing substances, and ethyl acetate extractives were prepared using three processes of hydrochloric acid acidification, glucose reduction, and ethyl acetate extraction, respectively. High performance liquid chromatography(HPLC), ultraviolet visible spectrophotometry(UV), and dual wavelength ultraviolet spectrophotometry(dW-UV) were established to analyze the contents of indigo and indirubin in samples from three processes. The optimal analysis methods for each of three samples were determined through Kolmogorov Smirnov test, comparison of Bland Altman deviation plots, and Spearman test. The results showed that the established HPLC, UV, and dW-UV methods were simple, accurate, highly sensitive, stable, and reproducible. Three methods for detecting the content of indigo extract components all followed the normal distribution, and there were significant differences between each the two measured values. The UV method was more suitable for analyzing the content of indigo in indigo acidified substances and indigo reducing substances. HPLC method was more suitable for measuring the content of indigo and indirubin in ethyl acetate extract.

Key words: indigo, indirubin, statistic analysis, HPLC method, UV spectrometry

中图分类号:

TQ35
TQ91

王成章, 颜洋洋, 周昊, 刘丹阳, 商士斌, 张华兴. 靛蓝提取物中靛蓝和靛玉红的分析方法比较[J]. 生物质化学工程, 2024, 58(1): 18-26.

Chengzhang WANG, Yangyang YAN, Hao ZHOU, Danyang LIU, Shibin SHANG, Huaxing ZHANG. Comparation of Three Methods of Analytical Methodology of Indigo and Indirubin in Different Indigo Extracts[J]. Biomass Chemical Engineering, 2024, 58(1): 18-26.

图/表 6

表1

表2

图1

图2

图3

图4

参考文献 21

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样品 samples	灰分/% ash content	酸不溶灰分/% acid-insoluble ash content	差值/% difference
靛蓝粗提物 indigo crude extract	49.53	10.58	38.95
靛蓝酸化物 acidification indigo extract	13.35	5.84	7.51
靛蓝还原物 glucose reduction indigo extract	1.70	1.59	0.11
乙酸乙酯提取物 ethyl acetate extraction indigo	3.93	2.73	0.90

分析方法 analytical method	组分 component	回归方程 linear equations	相关系数(R²) correlation coefficient	线性范围/(mg·L^-1) linear range
高效液相色谱法(HPLC)high performance liquid chromatography	靛蓝indigo	y=6.78×10⁷x+134 378	0.992	5~40
高效液相色谱法(HPLC)high performance liquid chromatography	靛玉红indirubin	y=1.25×10⁷x+75 747	0.992	3~24
紫外可见分光光度法 ultraviolet visible spectrophotometry	靛蓝indigo	y=68.31x+0.121 9	0.992	5~40
紫外可见分光光度法 ultraviolet visible spectrophotometry	靛玉红indirubin	y=38.21x+0.001 3	0.999	3~24
双波长紫外分光光度法 dual wavelength ultraviolet spectrophotometry	靛蓝(610 nm)indigo	y=68.31x+0.121 9	0.992	5~40
	靛蓝(545 nm)indigo	y=24.50x-0.003 2	0.999	5~40
	靛玉红(610 nm)indirubin	y=5.90x-0.000 3	0.999	3~24
	靛玉红(545 nm)indirubin	y=38.21x+0.001 3	0.999	3~24

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